Le thème de la Cène a souvent inspiré Tintoret. Celle-ci met en scène le moment où le Christ vient de prononcer "L'un d'entre-vous me livrera" (Matthieu 26,21 ; Marc 14,18 ; Luc 22,21, Jean 13,21). Les apôtres traduisent ici avec vivacité leur étonnement, alors que Judas vêtu de rouge vif, au premier plan, interrompt son geste de prendre une fiasque sur le sol.
L'ensemble est sombre, mis à part la lumière surgissant d'un portique dans le fond, qui auréole le Christ.