Tiré du livre de Judith, texte le plus célèbre des deutérocanoniques bibliques. Le tableau s'intéresse au moment où Judith, assistée de sa servante, décapite le général qui s'est endormi ivre.
Le tableau est d'une grande intensité physique, qu'il s'agisse des grands jets de sang qui jaillissent de la blessure ou de l'énergie déployée par les deux femmes qui commettent le meurtre. L'effort est particulièrement bien représenté sur le visage de la servante, personnage absent de la Bible, qui est ici beaucoup plus jeune que dans la plupart des tableaux sur ce sujet : on la voit saisie au col par le poing énorme et musculeux d'Holopherne, qui lutte pour survivre.
La scène est tirée d'un épisode biblique, mais c'est elle-même qu'Artemisia Gentileschi emploie comme modèle pour Judith, tandis qu'Holopherne a les traits de son ancien mentor et violeur Agostino Tassi dont le procès se déroula l'année de réalisation du tableau alors qu'Artemisia avait été torturée pour "vérifier" qu'elle ne portait pas de fausses acusations.
Artemisia Gentileschi en avait donné une première version en 1614.